طول موج (نانومتر): ۲۲۰ پنی‌سیلین، ۲۸۰ کلرامفنیکل، ۳۲۰ تتراسایکلین
سرعت جریان: ۱ ml/min
حجم تزریق: ۲۵ میکرولیتر
نوع آشکارساز: UV
برنامه نرم‌افزاری برای کنترل سیستم و جمع‌ آوری اطلاعات:milinium

( اینجا فقط تکه ای از متن فایل پایان نامه درج شده است. برای خرید متن کامل پایان نامه با فرمت ورد می توانید به سایت feko.ir مراجعه نمایید و کلمه کلیدی مورد نظرتان را جستجو نمایید. )

کاتر
Zipe Kipe
Bag Mixer
Sigma 500cc
Plate
Pipet 10cc
ارلن مایر ۵۰۰cc
ارلن مایر ۲۵۰cc
لوله آزمایش
حلقه کشت
گرم خانه ۳۷ درجه سانتی‌گراد
گرم خانه ۴۲ درجه سانتی‌گراد
لام و لامل
کواکس
لوله دورهام
ترازو
سوزن کشت

روش اریمونواسی

ایمونواسی یک راه ساده و کوتاه از تقابل آنتی‌ژن و آنتی‌بادی است. این روش خیلی قوی و مؤثر برای اندازه‌گیری واحد‌های خیلی کوچک مانند ng/ml و pg/ml در محلول‌هایی همچون پلاسما، ادرار و محیط‌کشت‌های سوپرناتانت استفاده می‌شوند. به طور اساسی در روش ایمونواسی از یک آنزیم برای اتصال آنتی‌ژن به آنتی‌بادی استفاده می‌شود. این آنزیم باعث می‌شود که سوبسترای بی‌رنگ دارای یک رنگ خالص شوند که این امر نشان دهنده آنتی‌ژن به آنتی‌بادی است. این روش می‌تواند به صورت‌های مختلف آنتی‌ژن و آنتی‌بادی را شناسایی کند. این موضوع بستگی به طراحی آزمایش مورد نظر دارد.

بررسی باقیمانده تتراسایکلین‌ها با روش ایمونواسی

روش آماده‌سازی نمونه‌های

شیر:

ابتدا باید چربی شیر گرفته شود چون چربی شیر می‌تواند یکی از عوامل باشد که باعث مخدوش شدن جواب های آزمایش شود. PH شیر نیز باید در نظر گرفته شود چون شیر ترش شده می‌تواند کیفیت آزمایش را تحت تأثیر قرار دهد.
۱-شیر سرد را در دما °c4 به مدت ۱۵ دقیقه در دور ۲۰۰۰ سانتریفوژ کرده
۲-به وسیله یک کاردک چربی جمع شده بر سطح نمونه را جمع آوری کرده
۳-۰/۷۵ml از نمونه ای که چربی آن گرفته شده را به یک لوله تمیز منتقل می کنیم و ۰/۲۵ml MTC بافر به آن اضافه نمود و به وسیله vortex آن را محفوظ می کنیم.
۴-۱۰۰µl از شیر بدون چربی را در ۲۰۰µl Sample dilution buffer اضافه کرده و سپس با vertex آن را مخلوط می کنیم.
۵- ۵۰این محلول را برای آزمایش الایزا استفاده می کنیم.

گوشت (قرمز، سفید):

۱-۱گرم از بافت گوشت را بریده و آن را چرخ می کنیم و در یک لوله تمیز می ریزیم.
۲-./۵mL آب مقطر به آن اضافه می کنیم و ۱/۵ mL متانول ۱۰۰% سپس به وسیله vortex آن را به خوبی مخلوط می کنیم.ذ
۳-در دمای °۲۵-°۲۰ در دور ۲۰۰۰ آن را سانتریفیوژ می کنیم.
۴- ۶۰ از محلول را بهdilution buffer350 اضافه کرده و آن را به وسیله vortex به خوبی مخلوط می کنیم.
۵-۵۰µl از محلول را برای آزمایش الایزا استفاده می کنیم.

تخم مرغ:

۱-۱گرم از یک تخم مرغ یک دست مخلوط شده را به یک لوله ۱۵mL پلاستیکی اضافه می کنیم.
۲-McIIvain buffer l mL با ۱ PH به آن اضافه می گردد (۱ : ۱ با متانول رقیق می‌شود).
۴- ۵۰ از محلول سوپر ناتانت را به یک لوله تمیز جدید منتقل می کنیم و ۲۰۰ml dilution buffer به آن اضافه می کنیم.
۵- از محلول را بر آزمایش الایزار استفاده می کنیم.

روش‌های آماده‌سازی محلول‌های مورد استفاده در آزمون :

Microtiter plate : نوارهایی که برای آزمایش قابل استفاده نیستند به سرعت باید به داخل یخچال برگردانده شود اما نوارهایی که باید برای آزمایش استفاده می‌شود باید به دمای محیط برسند.
در این کیت دو بافر وجود دارد TC buffer, dilution buffer M
Dilution buffer : بافر برای آماده سازی کونژوگه و Sample dilation buffer استفاده می‌شود و قبل از مصرف باید به نسبت ۴ : ۱ به وسیله آب مقطر رقیق شود. بافر دیگر به نام buffer MTC است که برای رقیق کردن نمونه شیر از آن استفاده می‌شود.
Sample dilution buffer : این بافر به صورت آماده در کیت وجود نداشته و باید آماده شود. Dilution buffer 18mL را به همراه ۲mL متانول ۱۰۰% مخلوط کرده آن را تا زمان استفاده در °c8 - °c2 نگهداری می‌کنیم.
McIIvain buffer : 0/2 از محلول سدیم دیباکسید را به همراه ۰/۲ از محلول تری سدیم سیترات دهیرات را آماده می کنیم و هر دو را با آب مقطر به حجم ۱ لیتر می رسانیم دو محلول را مخلوط کرده و آن را با HCLبه PH 7می رسانیم قبل از مصرف با متانول به نسبت ۱ : ۱ باید رقیق شود.
Standarl 2ng/ml :
باید چند رقت از استاندارد تتراسایکلین تهیه شود. ابتدا ۲ml sampel dilution buffer به استاندارد تتراسایکلین اضافه می کنیم این محلول حاوی ۲ng تتراسایکلین در ml است. ۰٫۲۵ml از این محلول را به یک لوله تمیز منتقل کرده و Sample dilution buffer 0.25ml به آن اضافه کرده این عمل را تکرار می‌کنیم تا رقت های ۱/۰ ، ۰/۵ ، ۰/۲۵ ، ۰/۰۲۵ ، ۰/۰۶۲۵ را بسازیم.
Conjugate: ویال لیوفیلیزه کونژگه را با ۶ml از dilution buffer مخلوط کرده و آن را در یک جای تاریک نگهداری می کنیم.